中华人民共和国国家标准
大豆制品中尿素酶活性测定方法
Method for the determination of urease
Activity in soya bean products
UDC 664.841.655:543.062
GB 8622－88
1 适用范围
本标准适用于大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。本法可确认大豆制品的湿热处理程度。
2 定义
本标准所指尿素酶活性定义如下：
在30±0.5℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
3 原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。
4 仪器和设备
4.1 样品筛：孔径200μm；
4.2 酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置；
4.3 恒温水浴：可控温30℃±0.5℃；
4.4 试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子；
4.5 精密计时器；
4.6 粉碎机：粉碎时应不生强热（例如球磨机）
4.7 分析天平：感量0.1mg。
4.8 移液管：10mL。
5 试剂和溶液
5.1 尿素（GB 696－77）：分析纯；
5.2 磷酸氢二钠（GB 1263－77）：分析纯；
5.3 磷酸二氢钾（GB 1274－77）：分析纯；
5.4 尿素缓冲溶液（pH6.9至7.0）：4.45g磷酸氢二钠（5.2）和3.40g磷酸二氢钾（5.3）溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素（5.1）溶在此缓冲溶液中，可保存１个月。
5.5 盐酸（GB 622－77）：分析纯，c(HCI)=0.1mol/L溶液；
5.6 氢氧化钠（GB 629－77）：分析纯，c(NaOH)=0.1mol/L标准溶液，按GB 601标准溶液制备方法的规定配制。
6 试样的制备
用粉碎机（4.6）将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛（4.1）。对特殊试样（水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。
7 测定步骤
称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管（4.4）中（如活性很高只称0.05g试样），移入10mL尿素缓冲溶液（5.4），立即盖好试管并剧烈摇动,马上置于30±0.5℃恒温水浴（4.3）中，准确计时保持30min，即刻移入10mL盐酸溶液（5.0），迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液（5.3）滴定至pH4.70。
另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液（5.4），10mL盐酸溶液(5.5)。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于30±0.5℃的恒温水浴，同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液（5.3）滴定至pH4.70。
8 测定结果的计算
8.1 计算方法
以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性Ｕ，按下式计算：
14 × C （V0 － V）
U＝——————————
30 × m
式中：c――氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L；
V0――空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL；
Ｖ――测定试样消耗氢氧化钠溶液的体积，mL；
m――试样质量，g。
注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则
14 × C （V0 － V）
U＝——————————×（1 － S）
30 × m
式中：Ｓ――预干燥时试样失重的百分率。
8.2 重复性
同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。
附加说明：
本标准由中国兽药监察所负责起草。
