中华人民共和国国家标准
大米中杀虫双残留量测定方法
Method for determination of Nereistoxin derivative
Sha chongshuang residues in rice
GB/T 14929.8－94
1 主题内容与适用范围
本标准规定了用气相色谱法测定大米中杀虫双和沙蚕毒素的含量。
本标准适用于大米中杀虫双、沙蚕毒素的残留量测定。
本方法最低检出限为0.1ng。
2 原理
大米样品经0.1mol/L盐酸提取后，在碱性溶液中，转化成沙蚕毒素，以三氯甲烷提取后，蒸除三氯甲烷，用甲醇定容至1mL，以FPD－GC测定。
3 试剂
3.1 0.1mol/L盐酸。
3.2 0.1mol/L氢氧化钠。
3.3 0.1mol/L硫化钠水溶液。
3.4 甲醇：分析纯，重蒸。
3.5 三氯甲烷：分析纯，重蒸加无水乙醇，使含1%乙醇。
3.6 无水乙醇：分析纯。
3.7 无水硫酸钠。
3.8 杀虫双标准溶液：精确称取杀虫双23.8mg，以甲醇溶解，稀释至100mL，每毫升中杀虫双含量相当于沙蚕毒素100μg。根据需要，吸取一定量上述标准溶液，以甲醇稀释至一定体积，配制成应用液。
杀虫双转化：相当于沙蚕毒素4μg的杀虫双，按下述条件转化，最终浓度为每毫升含2μg沙蚕毒素。
3.9 沙蚕毒素标准溶液：精确称取沙蚕毒素草酸盐16.00mg，以甲醇溶解，稀释至100mL，每毫升含沙蚕毒素100μg，根据需要，吸取一定量上述标准溶液，以甲醇稀释至一定体积，配制成应用液。
4 仪器
4.1 台式离心机。
4.2 旋转蒸发器。
4.3 玻璃蒸馏器。
4.4 氮气蒸发器。
4.5 气相色谱仪（具火焰光度检测器，FPD）。
4.6 微量注射器。
4.7 一般玻璃仪器（略）。
5 分析步骤
5.1 样品处理：称取大米样品5g，加10mL 0.1mol/L盐酸溶液，在振荡器上振荡30min，于1600r/min离心10min，将上清液倒于带盖量筒中，再以10mL 0.1mol/L盐酸洗涤样品，如此重复三次。合并盐酸提取液，调节pH8.5～9，加0.1mol/L硫化钠溶液2mL放置过夜，加２倍样品液体积的三氯甲烷于分液漏斗中，剧烈振摇1min，静置分层。将三氯甲烷层经无水硫酸钠滤于三角瓶中，在旋转蒸发器中45℃蒸除氯仿，至剩余少许时，立即取出，用甲醇定容至1mL，待测定。
5.2 气相色谱条件：
5.2.1 色谱柱：3mm（内径）×2m玻璃柱；
填装涂有1.5%OV-17 Chromosorb W(80～100目)的担体。
5.2.2 温度
柱温：160℃；
汽化室温：200℃；
FPD检测器温：170℃。
5.2.3 气体速度
载气（氮气）流速：70mL/min；
氢气流速：150mL/min；
空气流速：50mL/min。
5.2.4 其他条件
仪器灵敏度：×102；
衰减：×32；
纸速：12.5px/min。
5.3 测定：
按上述色谱条件调试仪器，待仪器稳定后，用微量注射器注入样品或标准液，以保留时间为定性指标。
取杀虫双转化后相当于0.5、1、2、3、4、5ng的沙蚕毒素，注入色谱仪中，测量峰高。以杀虫双含量为横坐标，峰高为纵坐标，在双对数坐标纸上绘制工作曲线，根据样品的峰高定量。
6 计算
式中：Ｘ――样品杀虫双含量，mg/kg；
Ｂ――测得样品的峰高（或面积）值，查标准曲线后得到的沙蚕毒素量，ng；
Ｖ――定容体积，mL；
Ａ――进样量，μL；
m――样品质量，g。
杀虫双分子量为355，沙蚕毒素分子量为149，将测得的沙蚕毒素量乘以2.38，即为杀虫双含量。
7 精密度
大米样品添加回收实验结果的变异系数小于20%。
8 其他
大米中沙蚕毒素及标准沙蚕毒素色谱图如下：
沙蚕毒素色谱图
１－标准杀虫双转化为沙蚕毒素；２－大米中杀虫双转化成沙蚕毒素
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。
本标准主要起草人王绪卿、林媛真、陈惠京。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
