中华人民共和国国家标准
豆类 配糖氢氰酸含量的测定
Pulses-Determination of glycosidic hydrocyanic acid
GB/T 15665－1995
本标准非等效采用国际标准ISO 2164：1975《豆类－配糖氢氰酸测定》方法。
1 主题内容与适用范围
本标准规定了豆类配糖氢氰酸测定方法。
本标准适用于豆类配糖氢氰酸测定。
2 引用标准
GB 601 化学试剂 滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备
3 原理
豆类中配糖体氢氰经水解后，进行水蒸气蒸馏，蒸出的氢氰酸被碱液吸收，以碘化钾作指示剂，用硝酸标准溶液滴定氢氰酸，银离子首先与氢氰酸根离子络合反应，形成可溶性络合物[Ag(CN)2]，到达终点时，多余的硝酸银与碘离子反应，生成持续浑浊沉淀，指示终点，以消耗硝酸银标准溶液的用量，计算氢氰酸的含量。
4 试剂
全部试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。
4.1 乙酸钠溶液：2%(W/V)，称取20g乙酸钠（GB 693）溶于水，用乙酸调至pH5.0±0.5，加水至1000mL。
4.2 磷酸二氢钾溶液：2%(W/V)，称取20g磷酸二氢钾（GB 1274）溶于水，稀释至1000mL。
4.3 氢氧化钠溶液：5%(W/V)，称取50g氢氧化钠（GB 629），溶于水，稀释至1000mL。
4.4 氨溶液：6mol/L，量取400mL氨水（GB 631），加水稀释至1000mL。
4.5 碘化钾溶液：5%(W/V)，称取50g碘化钾（GB 1272），溶于水，稀释至1000mL。
4.6 硝酸银标准溶液：0.004mol/L，按GB 601制备标定。
4.7 甜杏仁。
5 仪器、设备
5.1 水蒸气蒸馏装置：蒸馏烧瓶2000～2500mL。
5.2 凯氏瓶：1000mL。
5.3 锥形瓶：250mL。
5.4 容量瓶：250mL。
5.5 移液管：100mL。
5.6 微量滴定管：10mL。
5.7 分析天平：感量0.001g。
5.8 冰浴。
5.9 粉碎机：要求容易清洗，粉碎时不致发高热而影响样品中的水分含量。
5.10 筛：孔径1mm。
5.11 培养箱：温度控制在38±2℃。
6 分析步骤
6.1 试样的选取与制备
选取有代表性的样品，按四分法缩减取样，取样量不得少于300g。样品用粉碎机（5.9）磨碎，过筛（5.10），弃去初始的少部分粉样，收集其余粉样于广口瓶中，以备测试之用。
6.2 试样水解
6.2.1 水解法
称取20g试样，精确至0.1g，置于1000mL凯氏瓶（5.2）中，加入50mL水和10mL乙酸钠溶液（4.1）或磷酸二氢钾溶液（4.2），塞紧瓶口，充分混匀，将其放在38℃培养箱（5.11）中水解12h。
6.2.2 酶解法
称取20g试样，精确至0.1g，置于1000mL，凯氏瓶（5.2）中，加入2个碎裂甜杏仁（不含氢氰酸）1.5～2.0g，加入50mL水，塞紧瓶口，将其放在38℃培养箱中酶解2h。
注：6.2.1和6.2.2这两种解法，可任选一种。酶解法较适合于 些酶活性不强的样品。
6.3 试样蒸馏
将水解后的试样，置冰浴上冷却15～20min，加入80mL水和一滴消泡剂，立刻将凯氏瓶连接到蒸馏装置（5.1），使冷凝管下端浸入盛有20mL氢氧化钠溶液（4.3）的锥形瓶（5.3）液面下，通入蒸汽进行蒸馏，收集100～150mL馏出液。取下锥形瓶时，冲洗冷凝管末端，将馏出液转移到250mL容量瓶中，定容。
6.4 滴定
用移液管（5.5）取两份100mL馏出液分别置于2个锥形瓶中，加2mL碘化钾溶液（4.5）和1mL氨溶液（4.4），混匀，在墨色背景衬托下，用硝酸银标准溶液（4.6）滴定，直至出现持续浑浊沉淀为终点。
6.5 当用上述程序滴定时，若出现浅黑色沉淀或褐色沉淀说明有S-2离子存在，则按下列方法测定：
分别吸取两份100mL馏出液于2个烧杯中，加入5mL硝酸铅溶液（5g/L）进行混合，静置15min，过滤，每次用10mL水洗涤烧杯和过滤三次，再加入2mL碘化钾溶液（4.5）和1mL氨溶液（4.4）到溶液中混合。用硝酸银标准溶液（4.6）滴定。
6.6 空白测定
蒸馏水代替馏出液，按6.4进行空白试验。
7 结果计算
配糖氢氰酸的含量以每公斤样品氢氰酸（HCN）的毫克数表示，按下式计算：
式中：Ｘ――试样中氢氰酸含量，mg/kg；
V1――试样测定消耗硝酸银标准溶液体积，mL；
V0――空白滴定消耗硝酸银标准溶液体积，mL；
c――硝酸银标准溶液的摩尔浓度，mol/L；
54――2倍氢氰酸分子量；
m――试样的质量，g。
7.2 分析结果表述
同一试样的两个平行测定结果，用算术平均值表示，精确到小数点后一位。
当所得结果每公斤样品中氢氰酸含量少于10mg，则实际上可以认为样品不含配糖氢氰酸。
附加说明：
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国农业分析标准化技术委员会归口。
本标准由中国农科院分析测试中心负责起草。
本标准主要起草人李玉芳、刘素云。
