中华人民共和国国家标准
高粱中单宁含量的测定
Sorghum-Determination of tainnin content
GB/T 15686-1995
本标准等效采用国际标准ISO 9648:1988《高粱中单宁含量测定方法》。
1 主题内容与适用范围
本标准规定了高粱中单宁含量的测定方法。
本标准适用于高粱中单宁含量的测定。
2 引用标准
GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法
GB 5497 粮食、油料检验 水分测定法
3 原理
用二甲基甲酰胺溶液振荡提取高粱单宁。过滤后取滤液,在氨存在的条件下,与柠檬酸铁铵形成一种棕色络合物,用分光光度计在525nm波长处测定其吸光度值,与标准系列比较定量。
4 试剂及溶液
所有试剂均为分析纯,水为蒸馏水。
4.1 单宁酸标准溶液:2.5g单宁酸溶于水中,定容至1000mL。该溶液避光、低温保存,一周内稳定。单宁酸标准来源不同,对测定结果有影响。因此,推荐使用分子量为1701.25的单宁酸作为标准品,并且配制0.3mg/mL的单宁酸标准溶液,按6.5.2测得吸光度值应在0.45~0.55范围之内。
4.2 8.0g/L氨溶液:取浓氨水(25%~28%)3.6mL,定容至100mL。
4.3 75%(V/V)二甲基甲酰胺溶液:取75mL二甲基甲酰胺,加水约20mL,混匀,放至室温,然后定容至100mL。
注:意:二甲基甲酰胺对肺、皮肤和眼睛有伤害。
4.4 3.5g/L柠檬酸铁铵溶液:柠檬酸铁铵试剂铁的含量在17%(m/m)~20%(m/m)之间;3.5g/L溶液,使用前24h配制。
5 仪器
5.1 分析天平;感量0.0001g。
5.2 机械粉碎机;带孔径为1.0mm的筛子。
5.3 中速滤纸。
5.4 振荡机。
5.5 可见分光光度计:10mm比色皿。
5.6 移液管:50mL。
5.7 刻度移液管:1mL、10mL。
5.8 试管。
5.9 容量瓶:25mL。
5.10 具塞三角瓶:100mL。
6 分析步骤
6.1 试样制备
按GB 5491取样。
样品弃去杂质,用机械粉碎机粉碎,并全部通过1.0mm孔径的筛子,充分混匀。
粉碎的高粱试样在避光、干燥的条件下最多保存几天。因此,试样粉碎后应尽快测定。
6.2 水分测定
按GB 5497测定试样水分含量。
6.3 提取
称取试样约1g,精确至0.0001g,置于100mL三角瓶中,准确加入50mL 75%二甲基甲酰胺溶液,加塞子密封,于振荡机上振荡60min,然后用双层滤纸过滤,滤液备用。
6.4 测定
6.4.1 用称液管吸取提取液(6.3)1.0mL,置于试管中,用移液管移加6.0mL水和1.0mL氨溶液,振荡均匀、静置。自加氨水10min后,以水作空白,用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。
6.4.2 用移液管吸取提取液(6.3)1.0mL,置于试管中,用移液管移加5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液,振荡均匀,再加1.0mL氨溶液,充分振荡均匀、静置。自加氨水10min后,以水作空白,用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。
结果为两次测定吸光度值之差。
6.5 绘制标准曲线
测定试样的当天,按以下步骤绘制标准曲线。
6.5.1 用移液管准确吸取0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL单宁酸标准溶液(4.1),分别置于6个25mL容量瓶中,用75%二甲基酰甲胺溶液稀释至刻度(标准溶液系列分别相当于0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mg/mL单宁酸含量)。
6.5.2 用移液管分别吸取以上单宁酸标准溶液系列1.0mL,置于6只试管中,各准确加入5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液,振荡均匀,再各加1.0mL氨溶液,充分振荡均匀、静置。自加氨水10min后,以水作空白,用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。
6.5.3 以吸光度值作纵坐标,单宁酸标准溶液系列中单宁酸含量(mg/mL)作横坐标,绘制标准曲线。
7 结果计算
高粱单宁含量以干基中单宁酸质量的百分数来表示,按下式计算:
单宁(%)=
式中:c――试样提取液测定结果(6.4),从标准曲线上查得相当的单宁酸含量,mg/mL;
m――试样质量,g;
H――试样的水分,%。
8 重复性
由同一操作者同时或连续两次测定结果的允许误差不超过0.1%,取两次测定的平均值作为测定结果(保留小数点后第二位)。
附加说明:
本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。
本标准由国家粮食储备局归口。
本标准由郑州粮食学院负责起草。
本标准主要起草人霍权恭、范璐、周展明、朱之光、蔡凤英。