中华人民共和国国家标准
粮食、油料检验
过氧化氢酶活动度测定法
Inspection of grain and oilseeds
Methods for determination of hydrogen peroxidase activity
UDC (633.1+633.85).001.4
GB 5522－85
本标准适用于商品粮食过氧化氢酶活动度的测定。
1 仪器和用具
1.1 恒温水浴锅；
1.2 电炉；
1.3 离心机或吸滤装置；
1.4 锥形瓶：100ml；
1.5 量筒：10、15ml；
1.6 移液管：5、10、20ml；
1.7 研钵；
1.8 滴定管、细口瓶、漏斗等。
2 试剂
2.1 3%过氧化氢溶液：取30%过氧化氢溶液3ml加水稀释至30ml；
2.2 10%硫酸溶液；
2.3 0.1N高锰酸钾溶液；
2.4 pH7.7索伦逊磷酸盐缓冲液：
甲液，称取磷酸氢二钠11.876g溶于1Ｌ水中。
乙液，称取磷酸二氢钾9.078g溶于1L水中。
临用时，甲、乙液按9：1混合。
2.5 石英砂或用干净的玻璃片研制成的细砂。
3 操作方法
3.1 过氧化氢酶的提取：称取试样（能换算成无水试样1g），放入研钵中，加少量细砂，量取缓冲液50mL，先倒出5～10mL于研钵中研磨试样，然后经漏斗倒入锥形瓶中，用剩余的缓冲液洗净研钵和漏斗，再把洗液倒入锥形瓶内，振摇后静置2～3h，用吸滤法或离心沉淀法获得透明的提取液。
3.2 酶活动度的测定：摇匀提取液，吸取20mL注入锥形瓶中，加入20mL水和3mL3%过氧化氢溶液，在室温下放置15～30min，加入5mL10%硫酸溶液，摇匀，用0.1N高酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，记下用去的高锰酸钾溶液毫升数（Ｖ1）。
3.3 对照试验：吸取20mL提取液注入锥形瓶中，置于沸水浴中加热5min，或用直接煮沸法破坏过氧化氢酶。加20mL水和3mL3%过氧化氢溶液于锥形瓶中，在室温下放置15～30min，再加入10%硫酸5mL，摇匀，用0.1N高锰酸钾溶液滴定，记下用去的毫升数（Ｖ2）。
4 结果计算
过氧化氢酶活动度按下列公式计算：
过氧化氢酶活动度
式中：Ｖ1――酶活动度测定时所用的0.1N高锰酸钾体积，ml；
Ｖ2――对照试验时用去0.1N高锰酸钾溶液体积，ml；
Ｎ――高锰酸钾溶液当量浓度；
17――H2O2的毫克当量。
双试验结果允许差不超过平均值的10%，取平均值为测定结果。测定结果取小数点后第一位。
附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部提出。
本标准由商业部粮食储运局负责起草。
本标准主要起草人高修吾、杨浩然、吴艳霞、吕桂芬。
