中华人民共和国国家标准
水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉
测定法
Determination of amylose
In grains of rice, maize and millet
UDC 633.1:543.185
GB 7648－87
1 适用范围
本标准适用于水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉含量的测定。
2 参考标准
GB 5006－85《谷物籽粒淀粉测定法》
GB 3523－83《谷类、油料作物种子水分测定法》
3 测定原理
淀粉与碘形成碘－淀粉复合物，并具有特殊的颜色反应。支链淀粉与碘生成棕红色复合物，直链淀粉与碘生成深蓝色复合物。在淀粉总量不变条件下，将这两种淀粉分散液按不同比例混合，在一定的波长和酸度条件下与碘作用，生成由紫红到深蓝一系列颜色，代表其不同直链淀粉与支链淀粉含量比例，根据吸光度与直链淀粉浓度呈线性关系，可用分光光度计测定。
4 仪器、设备
4.1 粉碎机（实验室用旋风磨）。
4.2 分光光度计：721型或具有相同性能的其他型号。
4.3 分析天平：感量0.0001g。
4.4 玻璃仪器：50mL具塞刻度试管，100mL容量瓶。
5 试剂配制
除注明者外均为分析纯，水为蒸馏水。
5.1 氢氧化钠（GB 629－81），1mol·L-1、0.09mol·L-1水溶液，准确标定。
5.2 冰乙酸（GB 676－78），1mol·L-1水溶液，准确标定。
5.3 碘贮备溶液及碘试剂：称2g碘和20g碘化钾（GB 1272－77）用蒸馏水溶解并稀释至100mL，即为碘贮备液。取10mL碘贮备液稀释至100mL，即为碘试剂。
5.4 马铃薯直链淀粉标准溶液：1mg/mL，取烘干（55～56℃真空干燥）的马铃薯直链淀粉纯品，称取重量相当于含0.1000g淀粉，放入100mL容量瓶中，加入1mL无水乙醇湿润样品，再加9mL 1mol·L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴分散10min，迅速冷却后，用水定容。
5.5 支链淀粉标准溶液：1mg/mL，选择与待测谷物样品相应的蜡质谷物标准品，称取重量相当于含0.1000g粗淀粉，放入100mL容量瓶中，加1mL无水乙醇，再加9mL 1mol·L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴加热10min，迅速冷却后，用水定容。
5.6 石油醚（HG 3－1003－76），沸程60～90℃。
6 样品的选取和制备
6.1 将样品挑选干净（谷子脱壳、稻谷制成精米），按四分法取样20g。
6.2 用粉碎机将样品粉碎，全部通过0.177mm孔径筛（80号），混匀装入磨口瓶备用。
7 测定步骤
7.1 混合校准曲线绘制
取6个100mL容量瓶，分别加入1mg/mL马铃薯直链淀粉标准溶液0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00mL，再依次加入1mg/mL支链淀粉标准溶液5、4.75、4.50、4.00、3.50、3.00mL，总量为5mL。另取1 个100mL容量瓶，加入0.09mol·L-1氢氧化钠溶液5mL作空白。然后于各瓶中依次加入约50mL水、1mL 1mol·L-1乙酸及1mL碘试剂。用水定容后显色10min，在620nm处读取吸光度。
以直链淀粉毫克数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线或建立回归方程。
7.2 样品测定
7.2.1 按GB 5006－85《谷物籽粒粗淀粉测定法》和GB 3523－83《谷类、油料作物种子水分测定法》测定样品的粗淀粉含量和水分。
7.2.2 样品分散：称取相当于0.1000g粗淀粉的样品（如按样品干重计算直链淀粉百分含量时，称取样品100mg）于100mL容量瓶中，加1mL无水乙醇，充分湿润样品，再加入9mL 1mol·L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴中分散10min，迅速冷却，用水定容。
7.2.3 脱脂：取20mL分散液于50mL具塞刻度试管中，加入7～10mL石油醚，间歇摇动10min，静止15min，分层后用连接在水泵上的吸管抽吸，吸去上部石油醚层。重复以上操作2～3次（精米脱脂二次，玉米、谷子须脱脂三次）。
7.2.4 测定：吸取脱脂后的碱分散液5.00mL于100mL容量瓶中，加入50mL，再加入1mol·L-1乙酸溶液1mL及碘试剂1mL，用水定容。显色10min后，在620nm处读取吸光度。
注：测定样品与绘制校准曲线时的温度相差不能超过±1℃。
8 结果计算
8.1 计算公式
a. 直链淀粉（%,占淀粉总量）按式(1)计算：
直链淀粉(%，占淀粉总量)＝ 
…………………………………………（１）
b. 直链淀粉（%，占样品干重）按式（２）计算：
直链淀粉（%，占样品干重）＝ 
…………………………（２）
式中：Ｇ――从相应的混合校准曲线或回归议程求出的直链淀粉质量，mg；
m1――称取样品中所含粗淀粉的质量，100mg；
m2――称取样品的质量，100mg；
Ｈ――水分百分率。
8.2 结果表示
两个平行测定的结果，用算术平均值表示。保留小数点后两位。第三位数的舍入见GB 1.1 – 81《标准化工作导则 编写标准的一般规定》附录Ｃ。
8.3 结果的允许误差
两个平行测定值的相对误差，不得超过2%。
附录Ａ
马铃薯直链淀粉纯品制备方法
（参考件）
A.1 仪器、设备
A.1.1 离心机(4000r/min)。
A.1.2 电动搅拌器。
A.1.3 冰箱。
A.1.4 真空干燥箱。
A.1.5 磁力搅拌器。
A.1.6 232型甘汞电极或具有相同性能的其他型号。
A.1.7 213型铂电极或具有相同性能的其他型号。
A.1.8 0～1.000V毫伏表。
A.2 试剂
除注明外，均为分析纯，水为蒸馏水。
A.2.1 氢氧化钠（GB 629－81），0.5mol·L-1、2mol·L-1水溶液。
A.2.2 盐酸（GB 622－77），1mol·L-1、1.5mol·L-1、2mol·L-1水溶液。
A.2.3 正丁醇（HG 3－1012－76）。
A.2.4 异戊醇（HG 3－996－76）。
A.2.5 碘酸钾标准溶液：称取0.1784g碘酸钾（GB 651－77，优级纯）用水溶解后，转入1000mL容量瓶中用水定容，即8.34×10-4mol·L-1。
A.2.6 碘化钾溶液：称取66.40g碘化钾（GB 1272－77）用水稀释至1000mL，即0.4mol·L-1。
A.3 制备方法
称取马铃薯淀粉10g，加入少量无水乙醇使样品湿润，再加入350mL 0.5mol·L-1氢氧化钠，放入沸水浴中加热搅拌20min至完全分散，冷却，以4000r/min离心20min，取上清液用1.5mol·L-1盐酸调至pH6.5（用pH精密试纸），然后加入１：１（Ｖ／Ｖ）丁醇－异戊醇80mL，在沸水浴中加热搅拌10min，冷却至室温。移入冰箱内（2～4℃）静置24h去掉上层污物层，以4000r/min离心15min，弃掉上清液，沉淀物即为粗直链淀粉。
用饱和正丁醇水溶液洗涤沉淀物（粗直链淀粉），4000r/min离心15min，将沉淀物转入200ml饱和正丁醇水溶液中，在沸水浴中加热溶解（10～15min），冷却至室温，放入冰箱内（2～4℃）24h，弃去上层污物层，以4000r/min离心15min，沉淀物再加200ml 饱和正丁醇水溶液加热溶解，反复纯化三次。最后沉淀物用无水以复洗涤离心3～4次，在真空干燥箱中（55～56℃）干燥。即得直链淀粉纯品。
A.4 纯品质量鉴定
A.4.1 淀粉含量测定
称0.1000g纯品加入 10mL 0.5mol·L-1氢氧化钠在沸水浴中加热分散，再加入21.5mL 2mol·L-1盐酸，在沸水浴回流水解2h，用费林氏液法（GB 5513－85《粮食、油料检验 还原糖和非还原糖测定法》）测定还原糖，乘以0.9，即得淀粉量，计算纯品含量。
A.4.2 碘－淀粉复合物吸收光谱测定
取5.4溶液2mL(1mg/mL直链淀粉)及0.09mol·L-1氢氧化钠溶液3mL加50mL水稀释后，再加入1mol·L-1乙酸溶液1mL和碘试剂1mL，用水定容至100mL，显色10min，于分光光度计测定500～800nm的吸收谱。
A.4.3 碘结合量测定
A.4.3.1 测定
称取重量相当于含0.1000g淀粉的烘干马铃薯直链淀粉纯品于100mL容量瓶中，加几滴无水乙醇湿润后再加入0.5mol·L-1氢氧化钠溶液10mL，置沸水浴完全分散，冷却、加水定容。吸5mL（含直链淀粉5mg）分散液放入200mL烧杯中，加入85mL水，5mL1mol·L-1盐酸及5mL 0.4mol·L-1碘化钾溶液，按电位滴定装置要求，把烧杯置于电磁搅拌器上，将铂电极及甘汞电极插入液面下，在电磁搅拌下，用5mL微量滴定管滴加碘酸钾标准溶液，每次滴加0.2mL（或0.1mL），加后1min读取毫伏数，滴定终点用二次微商法计算。
A.4.3.2 计算
直链淀粉碘结合量，%＝
式中：m――直链淀粉质量，mg；
Ｔ――8.34×10-1mol·L-1碘酸钾溶液滴定体积，mL；
0.6346――每毫升8.34×10-4mol·L-1碘酸钾溶液相当于碘的质量，0.6346mg。
A.4.4 马铃薯直链淀粉纯品标准
马铃薯直链淀粉纯品必须具备：a. λmax为640～650nm；b.淀粉含量在85%以上；c. 碘结合量在19.5以上；d.
，λmax在20℃时为340以上。
附录Ｂ
水稻、玉米、谷子支链淀粉标准品的选择与制备
（参考件）
B.1 碘－淀粉复合物吸收光谱测定
取5.5溶液5mL(1mg/mL支链淀粉)，加50mL 水稀释后，再加入1mol·L-1乙酸溶液1mL和碘试剂1mL，加水至100mL，显色10min，用分光光度计测定400～640nm的吸收谱。
B.2 标准品的选择
水稻、玉米、谷子支链淀粉标准品可以从相应的蜡质谷物品种中选择，标准品必须分别具备：
水稻：λmax520～530nm，
，620nm，在20℃时为17以下；
玉米：λmax530～540nm， ，620nm，在20℃时为25以下；
谷子：λmax530～540nm， ，620nm，在20℃时为22以下；
B.3 标准品制备
取适量（10～20g）通过0.177～0.149mm孔径筛（80～100号）的蜡质谷粉，分别用甲醇及石油醚在索式脂肪抽提器回流脱脂16h，放入真空干燥箱烘干（55～56℃）备用，同时按GB 5006－85测定淀粉含量。
附加说明：
本标准由黑龙江省农业科学院综合化验室负责起草。
本标准主要起草人孟广、李霞辉、何照范。
